欧洲酿造协会（EBC）方法

标准号与适用范围

原理

操作步骤

1. 样品准备

• 将酒花样品粉碎，使其粒度均匀，确保能充分与萃取溶剂接触。准确称取一定量（通常约 2g）的粉碎样品至萃取容器。

2. 萃取

• 加入异辛烷 - 甲醇混合萃取剂，振荡萃取一段时间（如 30 分钟），让 α - 酸充分溶解到溶剂中。之后将溶液转移至分液漏斗，加入适量水洗涤，分离出有机相。

3. 显色

• 取一定体积的有机相，加入碱性碘化钾溶液，在暗处反应一定时间（如 10 分钟），使 α - 酸与试剂充分反应形成有色络合物。

4. 测量吸光度

• 使用分光光度计在 325nm 波长下测量显色溶液的吸光度。同时，制备一系列已知浓度的 α - 酸标准溶液，按相同步骤操作并测量吸光度，绘制标准曲线。

5. 结果计算

• 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出对应的 α - 酸浓度，再结合样品称取量和定容体积等参数，计算出样品中 α - 酸的含量。

美国酿造化学家协会（ASBC）方法

标准号与适用范围

原理

操作步骤

1. 样品处理

• 精确称取适量（一般 2 - 5g）粉碎后的酒花样品放入萃取瓶。

2. 萃取过程

• 加入异辛烷 - 甲醇混合溶剂，振荡萃取一定时间（如 15 - 30 分钟），然后将溶液转移到分液漏斗，加水洗涤后分离出有机相，将有机相转移至容量瓶并定容。

3. 显色反应

• 取一定量定容后的溶液，加入特定显色剂（如碱性碘化钾），在适宜条件下反应（如室温、避光反应 5 - 10 分钟）。

4. 吸光度测定

• 用分光光度计在 325nm 波长处测量显色溶液吸光度。同时制作 α - 酸标准溶液系列，按相同流程操作并测吸光度，绘制标准曲线。

5. 含量计算

• 根据样品吸光度从标准曲线查得 α - 酸浓度，结合样品相关参数计算出 α - 酸含量。

高效液相色谱法（HPLC）相关国际标准趋势

1. 样品前处理

• 准确称取酒花样品，用合适的溶剂（如甲醇 - 水混合液）超声提取，离心后取上清液，经滤膜过滤去除杂质。

2. HPLC 分析

• 选用合适的色谱柱（如 C18 反相柱），配制特定的流动相（由水、有机溶剂及酸等组成），将处理后的样品注入 HPLC 系统，在特定条件下分离 α - 酸。

• 通过紫外检测器（通常检测波长为 314nm）检测 α - 酸，同时进样标准品绘制标准曲线，最后根据样品峰面积或峰高计算 α - 酸含量。